Redigerer Enzymkoblet immunadsorberende analyse (avsnitt)

== Utførelse ==
Prinsippet er å få et antigen til å binde seg til vegger og / eller bunn i brønnene i en [[mikrotiterplate]].<ref name="SB 2011"/>
[[Fil:Microtiter plate.JPG|thumb|300px|right|En 96-hulls mikrotiterplate som benyttes for ELISA]]
Til brønnene settes så en prøve med det [[antistoff]], rettet mot det antigen som skal bestemmes.Etter at antisfoffene i prøveløsningen har bundet seg, vaskes bort komponenter i prøven som ikke har bundet seg, vanligvis med en PBS-løsning med tilsats av Tween. Deretter tilsettes en løsning med et sekundært antistoff fra et annet dyreslag (traceren) som kun har spesifisitet for det primære antistoff. Til traceren har man koblet (konjugert) et [[enzym]] (for eksempel [[Peroxidase|pepperrotsperoxidase]] eller [[Fosfatase|alkalisk fosfatase]]). Overskuddet av tracer vaskes ut. Det enzym som er tilbake bundet gir så i neste steg et signal gennom en enzymreaksjon der produktet er et farget eller [[Fluorescens|fluorescent]] stoff. Dette bestemmes med spesialtilpasset [[fotometer]]. Signalet er direkte relatert tll mengden bundet tracer. 

For pepperrotsperoxidase (HRP, fra engelsk ''Horseradish peroxidase'') brukes vanligvis TMB (3,3',5,5'-Tetrametylbenzidin). TMB danner et blått produkt i nærvær av veskeperoxid og peroxidase hvis fargeforandring kan avleses på et spektrofotometer ved en bølgelengde på 370 eller 655 nm. Reaksjonen kan stoppes ved tilsats av syre eller annen stoppreagens. Med svovelsyre blir TMB gul og fargen kan leses ved 450 nm.
 
For alkalisk fosfatase brukes vanligvis p-nitrofenylfosfat (vannløselig og fargeløst) som substrat. Det omvandles under reaksjonen til p-nitrofenol (sterkt gult i alkalisk løsning, med absorpsjonsmaksimum ved 405 nm) og fosfat. P-nitrofenylfosfat er kommersielt tilgjengelig i tablettform som enkelt løses i ønsket buffert for å slippe vanskelig oppveiing.
[[Fil:PNPPhydrolysis.jpg|thumb|300px|right|Hydrolyse av p-nitrofenylfosfat til p-nitrofenol og fosfat. I reaksjonsformelen er ingen hensyn blitt tatt til protonering av inngående reaktanter.]]